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數(shù)字PCR（Digital PCR，dPCR）實驗介紹

原理：是一種近年來興起的核酸分子絕對定量分析技術(shù)，數(shù)字PCR的面世解決了多年來qPCR一直沒有解決的問題，首先是數(shù)字PCR檢測靈敏度極高，可以檢測單個核酸分子，另外就是數(shù)字PCR并不依賴標(biāo)準曲線的絕對定量。數(shù)字PCR系統(tǒng)可將PCR反應(yīng)體系均勻分割成數(shù)萬個反應(yīng)微滴，每個微滴平行、獨立完成PCR擴增，通過判定每個微滴擴增完成后熒光信號的有無進行統(tǒng)計，最后根據(jù)泊松分布公式計算得到原體系中靶標(biāo)基因的初始濃度或拷貝數(shù)。數(shù)字PCR系統(tǒng)可應(yīng)用在：腫瘤液體活檢、無創(chuàng)產(chǎn)前診斷、病原微生物檢測、病毒載量測定、拷貝數(shù)變異、稀有突變檢測、基因相對表達研究、轉(zhuǎn)基因檢測、二代測序結(jié)果驗證等領(lǐng)域。

熒光定量PCR&數(shù)字PCR(ddPCR)區(qū)別：

實驗流程：

確認基因信息，制定實驗方案----DNA/RNA提取，質(zhì)檢----探針設(shè)計合成----上機擴增，讀取結(jié)果----分析實驗結(jié)果----發(fā)送檢測結(jié)果及數(shù)據(jù)分析

樣本保存運輸要求：

1，血液樣品：抗凝血＞0.5 ml，樣品采集后于-20°C 保存

2，動植物組織樣品：新鮮組織（-80°C 保存）或石蠟包埋的組織或95%乙醇中固定的組織，大于100 mg

需要確認的信息如下：

1、具體檢測什么樣本?什么種屬？

2、檢測指標(biāo)是哪些？  

3、是否提供陰性對照？  

4、探針和引物客戶是否提供？